产品货号：
SY0837
中文名称：
第一链cDNA合成试剂盒
英文名称：
Histan AdvanceFast 1st Strand cDNA Synthesis Kit
产品规格：
10T|100T
发货周期：
1～3天
产品价格：
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本试剂盒是基于Histan III 1st Strand cDNA Synthesis Kit(货号：SY0833)开发的快速逆转录试剂盒，适用于PCR扩增以及RT-qPCR实验。与SY0833相比，具有稳定的检出率、特异性、产量保证，且反转录总时长最快可低于6分钟，大大缩短了实验时间。
该试剂盒包含gDNA Digester Mix，可去除RNA模板中残留的基因组DNA污染，保证后续结果更加可靠。该试剂盒提供两种cDNA合成引物：Random Primers N6和Oligo (dT)18，用户可根据需要，选择Random Primers N6，Oligo (dT)18或Gene Specific Primers作为逆转录引物，合成的单链cDNA产物可直接用来进行后续PCR或者qPCR反应。
| 组分 | 10T | 100T |
| 4×HistanAdvanceFast SuperMix | 50μL | 500μL |
| 5×gDNA Digester Mix | 20μL | 200μL |
| Random Primers（50μM） | 20μL | 200μL |
| Oligo d(T)18 Primers（50μM） | 20μL | 200μL |
| RNase-free Water | 200μL | 1mL×2 |
保存：-20℃，有效期1年。逆转录产物可立即用于后续反应，也可-20℃短期保存，若需长期保存，建议分装后，于-80℃保存，避免反复冻融。
- 所有操作均应在冰上进行，且操作过程应避免RNase污染。
- 为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作。
- 本制品仅作科研用途！
一、若实验需要去除残留基因组DNA
- gDNA消化
在RNase-free离心管中配制如下混合液，用移液器轻轻吹打混匀。42℃孵育2min。成分 用量 RNase-free H2O 至10μL 5×gDNA Digester Mix 2μL 模板 Total RNA 10pg～5μg mRNA 10pg～500ng - 逆转录反应体系配制
注：成分 用量 上一步的反应液 10μL 4×HistanAdvanceFast SuperMix 5μL 引物 Oligo d(T)18 Primers（50μM） 2μL Random Primers (for qPCR)（50μM） 2μL Gene Specific Primer (2μM) 1μL RNase-free Water 至20μL - 引物投入量可根据模板投入量调整，如果逆转录产物用于qPCR实验，推荐Oligo (dT)18与Random Primers 1:1混合使用。
- 建议先加入4×HistanAdvanceFast SuperMix混匀后再加入逆转录引物，以保证引物不受gDNA Digester影响。
- 体系配制完成后，请用移液器轻轻吹打混匀。
- 引物投入量可根据模板投入量调整，如果逆转录产物用于qPCR实验，推荐Oligo (dT)18与Random Primers 1:1混合使用。
- 逆转录程序设置
温度 时间 55℃ 5min 85℃ 5s
二、若实验无需去除基因组DNA
- 逆转录反应体系配制
成分 用量 4×HistanAdvanceFast SuperMix 5μL 引物 Oligo d(T)18 Primers(50μM) 2μL Random Primers(for qPCR)(50μM) 2μL Gene Specific Primer(2μM) 1μL 模板 Total RNA 10pg～5μg mRNA 10pg～500ng RNase-free Water 至20μL - 逆转录程序设置
注：温度 时间 55℃ 5min 85℃ 5 s - 建议Total RNA的投入量不超过2μg。如果目的基因的表达丰度低，可增加投入量至最多5μg Total RNA。
- 对于高GC含量模板或者复杂模板，可将逆转录温度提高到60℃。
- 本制品可合成14kb以下的cDNA序列，如需得到更长的cDNA产物，可适当延长逆转录时间。
- 建议Total RNA的投入量不超过2μg。如果目的基因的表达丰度低，可增加投入量至最多5μg Total RNA。
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